PCR texnologiyası in vitro DNT replikasiyası prosesini təqlid edən nuklein turşusunun gücləndirilməsi üsuludur.Əsasən üç dövrü təkrarlayır: yüksək temperaturda denaturasiya, aşağı temperaturda tavlama və uzadılma, sonra hədəf DNT-ni milyonlarla dəfə gücləndirir.Beləliklə, PCR texnologiyası son dərəcə həssas olmaq üstünlüyünə malikdir.Bununla belə, hər bir sikkənin iki tərəfi var və PCR texnologiyasının ən böyük dezavantajı onun çirklənməyə çox həssas olmasıdır və çox az miqdarda çirklənmə yanlış müsbət nəticələrə səbəb ola bilər.
Laboratoriya nuklein turşusu ilə çirklənmə baş verdikdən sonra normal təcrübələr dayandırılmalıdır.Bundan sonra çirklənmə mənbəyi tapılana və ya laboratoriyanın təmizliyi standartlara cavab verənə qədər əhəmiyyətli maddi və insan resursları tələb olunur.Bundan əlavə, laboratoriya hesabatı etibarsız hesab edilməlidir.Nəticələr yalnız təkrar sınaqdan sonra etibarlıdır.
Çirklənmədən effektiv şəkildə qaçmaq və sabit və etibarlı test nəticələri əldə etmək üçün biz tez-tez praktikada çirklənmənin qarşısını almaq və ya aradan qaldırmaq üçün müəyyən tədbirlər görməliyik.
pcr boşqab
Çirklənmə mənbələri.
Reagentlərin çirklənməsi
PCR reagentlərinin hazırlanması zamanı reagent qabları, qablar, su və digər məhlullar nuklein turşuları ilə çirklənə bilər.
Avadanlıqların çirklənməsi
Yarımavtomatik nuklein turşusu ekstraktorları və tam avtomatik nuklein turşusu ekstraktorları nümunələrin və ya nuklein turşusu şablonlarının çıxarılması zamanı tökülməsinə və maşını çirkləndirə bilər.Yaxud avadanlığın içindəki zibil qabı hərtərəfli təmizlənmir və qalıq maye və ya kristallar buxarlanaraq aerozollar əmələ gətirir və bu da öz növbəsində çirklənməyə səbəb ola bilər.
Nümunənin çarpaz çirklənməsi
Nümunənin çarpaz çirklənməsinə müxtəlif amillər səbəb ola bilər: nümunə toplama qabının çirklənməsi;nümunənin yerləşdirildiyi zaman zəif möhürlənmə səbəbindən konteynerin tökülməsi;konteynerin kənarına yapışan nümunələr;havada inhalyatorun və aerozolların çirklənməsi.Xüsusilə, viruslar aerozollar vasitəsilə və ya aerozollar əmələ gətirərək yayıla bilər ki, bu da qarşılıqlı çirklənmə ilə nəticələnir.
PCR məhsulunun çirklənməsi
Bu, PCR-də ən çox görülən çirklənmə problemidir.Bu, adətən gücləndirildikdən sonra açılması və ya gücləndirildikdən sonra məhsulun düzgün idarə edilməməsi tələb olunan analizlərdə olur.Bunun səbəbi, PCR məhsulunun nüsxə ölçüsünün PCR tərəfindən aşkar edilmiş bir neçə nüsxənin maksimumundan çox böyük olmasıdır.Buna görə də, PCR məhsulunun çox az miqdarda çirklənməsi yanlış müsbət nəticə ilə nəticələnə bilər.
Plazmid çirklənməsinin klonlanması
Müsbət istinadlar adətən laboratoriya əməliyyatlarında istifadə olunur və bu müsbət istinadların əksəriyyəti müəyyən klonlaşdırılmış plazmidlərdən gəlir.Vahid həcmdə klonlanmış plazmidlərin konsentrasiyası çox yüksəkdir və diqqətlə istifadə edilmədikdə asanlıqla çirklənə bilər.
Bəzi laboratoriyalar öz plazmidlərini keyfiyyətə nəzarət məhsulları kimi klonlayır.Bununla belə, hazırlandıqdan sonra tullantılarla kifayət qədər ciddi şəkildə işlənmir, bu da laboratoriyanın plazmidlər və beləliklə, nümunələr tərəfindən çirklənməsinə səbəb olur.
Çirklənməyə nəzarət tədbirləri
Eksperimental bölmələr
Laboratoriyaların rasional ayrılması.Aşağıdakı mərhələlərin əməliyyatını bölmək və ya bölmək: nümunənin emalı, PCR reaksiya məhlulunun hazırlanması, PCR dövrünün gücləndirilməsi, PCR məhsulunun identifikasiyası və s. Bundan əlavə, nümunənin emalı və PCR məhsulunun identifikasiyası bir-birindən ayrılmalı olduğuna xüsusi diqqət yetirilməlidir. digər addımlar.
Onları aşağıdakılara bölmək yaxşıdır: nümunənin emal sahəsi, PCR reaksiya məhlulunun hazırlanması sahəsi, PCR dövrünün gücləndirilməsi sahəsi və PCR məhsulunun identifikasiya sahəsi.Və onların laboratoriya ləvazimatları və aspiratorları yalnız istifadə edilməlidir.
Laboratoriyada istifadə edilən UV qalıq DNT və ya RNT-ni məhv etmək üçün təcrübədən əvvəl sterilizasiya edilməlidir.
Hər zona üçün məqalələr qarışdırılmamalıdır
Hər bir laboratoriya sahəsi müxtəlif iş sahələrindən olan avadanlıq və əşyaların qarışdırılmaması üçün nəzərə çarpan rəngdə müxtəlif avadanlıq və əşyalarla aydın şəkildə qeyd edilməlidir.Məsələn, hər bir sahədə eksklüziv olaraq istifadə olunan iş paltarları, iş ayaqqabıları, zibil qabları, moplar, cır-cındırlar, qələmlər və s.
Birdəfəlik istifadə olunan pipet uclarından, sentrifuqa borularından, tozsuz əlcəklərdən, maskalardan və s. istifadə edin.
Standart kondisioner və ventilyasiya sistemi qurun
Mümkün olduqda tam çatdırılma və işlənmiş kondisioner sistemlərinin kondisioner sistemlərindən istifadə edin.Hər bir əməliyyat sahəsinə, yəni reagentin hazırlanması və saxlanması sahəsi → nümunənin hazırlanması sahəsi → PCR gücləndirmə sahəsi → gücləndirici məhsulun təhlili sahəsi, retrograd axın olmadan giriş zamanı ciddi vahid axın istiqaməti tələb olunur.
Çirklənmənin monitorinqi
Çirklənmənin monitorinqi aşağıdakı tədbirlərin görülməsi yolu ilə həyata keçirilir: müsbət və mənfi nəzarətin qurulması, təkrar testlərin aparılması, PZR gücləndirilməsi üçün müxtəlif bölgələr üçün primerlərin seçilməsi və s., beləliklə, çirklənmənin qarşısını almaq və aradan qaldırmaq üçün tədbirlər görmək.
Laboratoriyanın müntəzəm təmizlənməsi
Tərkibində 0,5% aktiv xlor olan dezinfeksiyaedici məhlul hazırlayın, avadanlığın səthlərini, dəzgahları, döşəmələri, əşyaların səthlərini, keçid qutularını, qapı və pəncərələri silmək, zibil qutularını avadanlığın içərisində islatmaq.
Alkoqoldan havaya püskürtmə yuxarıdan aşağıya, içəridən xaricə prinsipinə uyğun olaraq həyata keçirilir.
Pipetləri, səkkiz borulu sentrifuqaları, qarışdırıcı çalkalayıcıları və digər kiçik avadanlıqları spirtlə (75%) silin.
Avadanlıqların səthlərini, tezgahları və döşəmələri təmizlənmiş su ilə silin və avadanlıqların tullantı çənlərini təmizlənmiş su ilə yuyun.
www.DeepL.com/Translator ilə tərcümə olunub (pulsuz versiya)
Göndərmə vaxtı: 28 sentyabr 2022-ci il