1. Mən dondurulmuş hüceyrələrdən bir boru alsam, onu saxlama üçün birbaşa maye azotun içinə qoya bilərəmmi?
Bir çox hallarda quru buz üzərində (-80°C) daşınan hüceyrələr yenidən maye azotun içinə salına və sonra tez əridilə bilər.Lakin bu cür müalicədən sonra hüceyrə canlılığı azala bilər.Bəzi həssas hüceyrə xətləri üçün bu, hüceyrə bərpasını çətinləşdirə bilər.Bu hadisənin temperaturun dəyişməsi nəticəsində hüceyrələrin daxilindəki buz kristallarının strukturunun dəyişməsi ilə bağlı olduğu düşünülür.Buna görə də, alındıqdan sonra hüceyrələrin mümkün qədər tez əridilməsi və kultivasiya edilməsi tövsiyə olunur.-80°C-də saxlama müddətini azaldın.Bu temperatur yalnız nəqliyyat üçün istifadə olunur.
2. Bərpa üçün hüceyrələri maye azotdan çıxararkən hansı təhlükəsizlik tədbirləri görülməlidir?
Tamamilə möhürlənməmiş və içərisinə maye azot sızan maye azotda olan hüceyrə krioborular ərimə zamanı krioborunun temperaturu kəskin yüksəlsə, partlayışa səbəb ola bilər.Buna görə də hüceyrələri maye azotdan çıxararkən eynək və qoruyucu əlcək taxmaq tövsiyə olunur.Reanimasiya üçün, dondurucu məhlulu 1-2 dəqiqə ərzində tamamilə əritmək üçün dondurucu borunu 37°C su banyosunda davamlı silkələmək lazımdır.Daha sonra borunun xarici hissəsini spirt salfetlə silin, sonra onu ultra təmiz masaya aparın və hüceyrələri 10 ml mədəni mühit əlavə edilmiş sentrifuqa borusuna köçürün, 1000 rpm-də 5-10 dəqiqə sentrifuqa edin, tullantıları atın. supernatant, müvafiq miqdarda mədəniyyət mühiti əlavə edin və mədəniyyət kolbasını aşılayın və 5% CO2 inkubatorunda inkubasiya edin.
3. Nə üçün hüceyrələr maye fazada deyil, maye azot çəninin buxar fazasında saxlanmalıdır?
Maye azotun qaz fazasında saxlanılan hüceyrələrin canlanma ehtimalı daha yüksəkdir.Maye azotun maye fazasında, əgər liyofilizasiya boruları düzgün bağlanmayıbsa və ya sızıntılar varsa, hüceyrələrlə maye azot arasında birbaşa təmas ərimədən sonra hüceyrələrin canlılığını poza bilər.
4. Süspansiyon hüceyrələri üçün mədəniyyət mühitini necə dəyişdirmək olar?
Süspansiyon hüceyrələrinin kulturasiyası sadəcə təzə mühit əlavə etməklə (əgər yer imkan verirsə) və ya sentrifuqasiya yolu ilə hüceyrələri köhnə mühitdən ayırmaqla (5 dəqiqə ərzində 100 xg) və sonra çökmüş hüceyrələri təzə mühitdə yenidən suspenziya etməklə həyata keçirilə bilər.Bununla belə, əksər asma hüceyrə xətləri üçün sadəcə mühit əlavə etmək daha yaxşı üsuldur.Hər iki halda, hüceyrələr ən böyük doyma sıxlığına çatmazdan əvvəl mühit yenilənməlidir.Hüceyrələrin doyma sıxlığı hüceyrə xətti və mədəniyyət şəraitindən (istirahət və ya qarışdırma, oksigenləşmə səviyyələri və s.) asılı olaraq 3 x 10 5 və 2 x 10 6 arasında dəyişir.Hüceyrələrin loqarifmik şəkildə böyüməsini təmin etmək üçün kifayət qədər qida bərpasını təmin etmək üçün hüceyrələr daha aşağı hüceyrə konsentrasiyasına qədər seyreltilməlidir.Əgər mühit hüceyrə sıxlığını azaltmadan sadəcə dəyişdirilərsə, hüceyrələr mühiti sürətlə tükəndirəcək və öləcək.Hüceyrələr ən kiçik sıxlığın altında seyreltildikdə, onlar gecikmə mərhələsinə girəcək və çox yavaş böyüyəcək və ya öləcəklər.Hər bir asma hüceyrə xətti fərqli doyma sıxlığına və keçid intervalına malikdir, buna görə də gündəlik hüceyrə sayıları asma hüceyrə xətlərinə nəzarət etmək üçün bir yoldur*.
5. Hüceyrə kulturası üçün tövsiyə olunan CO2 səviyyəsi nədir?
Hüceyrə mədəniyyəti sistemlərində CO2 səviyyələri 0,03% -dən 40% -ə qədər (adətən atmosferdə təxminən 0,03% CO2) olsa da, havaya CO2 əlavə edilməməsi və ya CO2 konsentrasiyasının 5% -dən 10% -ə qədər olması çox yaygındır.Qaz fazasında CO2 səviyyəsi ilə balanslaşdırmaq üçün mühitdə natrium bikarbonatın konsentrasiyasını tənzimləmək vacibdir.Hüceyrələr CO2 istehsal edir və böyüməsi və yaşaması üçün az miqdarda karbon turşusu tələb edir.Əgər CO2 əlavə edilmirsə və hüceyrələr çoxalırsa, 4 mM (0,34 q/L) susuz natrium bikarbonat istifadə edilə bilər.Bununla belə, mədəniyyət kolbasının qapağı bu anda bərkidilməlidir.Mədəniyyət sistemi 5% və ya 10% CO2 tələb edirsə, ilkin pH təxminən 7,6 olan 37°C-də müvafiq olaraq 23,5 mM (1,97 q/L) və ya 47 mM (3,95 q/L) natrium bikarbonat istifadə edin.Bu şərtlərdə kolba qapaqsız qalmalı və ya qaz tarazlığını saxlamaq üçün Petri qabından istifadə edilməlidir.
6. Nə üçün bəzi hüceyrələr natrium piruvata ehtiyac duyur?Ortaya nə qədər natrium piruvat əlavə etməliyəm?
Piruvat hüceyrəyə asanlıqla daxil olan və onu tərk edən qlikolitik yolda* üzvi turşu metabolitidir.Buna görə də, natrium piruvatın mühitə əlavə edilməsi həm enerji mənbəyi, həm də anabolizm üçün karbon mənbəyi təmin edir, müəyyən spesifik hüceyrələrin saxlanmasına kömək edir, hüceyrələrin klonlanmasına kömək edir və ya mühitdə serum konsentrasiyası azaldıqda ehtiyac duyulur.Natrium piruvat da flüoresans ilə induksiya olunan sitotoksikliyi azaltmağa kömək edir.Natrium piruvat adətən 1 mM son konsentrasiyada əlavə edilir.Ticarətdə mövcud olan natrium piruvat məhlulları adətən 100 mM saxlama məhluludur (100X).
www.DeepL.com/Translator ilə tərcümə edilmişdir (pulsuz versiya).
Göndərmə vaxtı: 21 iyun 2022-ci il